Star Bright星光染料点亮光谱流式

光谱流式的概念于1979年首次提出¹并于2004年首次公开了功能性的光谱流式²，随后2007年Purdue大学获得了光谱流式的专利³。传统流式的光电设计理念是，根据激光激发的荧光染料发射谱图设计滤光片组合，特定波长的荧光分配到特定检测器。而光谱流式，反其道而行之，使用棱镜来收集穿过检测器阵列的所有发射光，而后使用复杂的算法区分不同的荧光信号，以分离和识别每个荧光染料。光谱流式的一个优势是能同时使用峰值发射相似的荧光染料，只要荧光染料的整个光谱有明显的特征。

StarBright星光染料是一种新型荧光纳米颗粒，它们专为流式细胞术开发，无需特殊的染色缓冲液，可用于所有常见的染色缓冲液，稳定性好并且批次间一致性好，适合所有流式细胞仪器，包括光谱流式细胞仪。在这里，将会展示StarBright独特的光谱特性如何成为光谱流式的理想选择，从而使多色Panel设计拥有更多选择和新的染料组合。

图1. StarBright 染料的光谱图。StarBright染料偶联的抗体在四激光Aurora光谱分析仪 (Cytek) 上生成的光谱图。StarBright UltraViolet-SBUV代表UltraViolet激光照射可激发；StarBright Violet-SBV代表Violet激光照射可激发；StarBright Blue-SBB代表Blue激光照射可激发。

光谱流式的一个优势是允许把多色免疫表型Panel扩展到40多个标记。不过，光谱流式仍需遵循良好的多色Panel设计的原则，比如抗原密度、荧光染料、Panel的亮度和优化。光谱流式细胞仪能够在多色面板中同时使用具有相似发射峰的荧光染料。许多StarBright 染料具有独特的光谱，因此可以使用具有相似最大发射峰的染料制成新颖的组合。兼容染料的示例有StarBright Blue 700 (SBB700) Dye 和 PerCP-Cy5.5、StarBright Violet (SBV) 400 Dye with Brilliant Violet (BV) 421 和 Pacific Blue、SBV475 with SBV515 和 BV510、SBV610 和 BV605，以及 SBV710 with BV711（图2）。

图2. 人外周血染色的StarBright染料组合示例。A，CD20PerCP-Cy5.5 与 CD45ROSBB700 (MCA461SBB700) ；B，CD4BV421、CD8Pacific Blue (MCA1226PB) 和 CD3SBV440 (MCA463SBV440)；C，IgDBV510、CD8SBV475 (MCA1226SBV475) 和 CD2SBV515 (MCA1196SBV515)；D，CD4BV605和CD8SBV610 (MCA1226SBV610)；E，TCR gdBV711 和 CD14SBV710 (MCA1568SBV710)。

尽管许多StarBright染料可以与具有相似最大发射的荧光染料一起使用，从而可以创建更大的Panel，但染料组合相似性如果得分很高，会导致过度扩散（如图2部分染料组合）。因此，应始终遵循Panel设计的最佳实践。将这些染料分离到相互排斥的标记上可以帮助抵消扩散的影响。图3为一个27色Panel的光谱流式结果示例，除了死活染料，12个StarBright染料偶联的抗体和其他染料进行灵活的联用，得到了很好的染色结果。

表. 27色Panel方案，SBUV- StarBright UltraViolet代表UltraViolet激光照射可激发，SBV- StarBright Violet代表Violet激光照射可激发，SBB-StarBright Blue代表Blue激光照射可激发，除了特别声明的抗体，其余所有抗体均来自Bio-Rad。其中死活染料并未包括在这个表格中。

图3. 27色Panel结果。人外周血样本经过红细胞裂解后，用live/dead死活染料染色后，用Brilliant染色缓冲液（BD，因BV系列染料的使用需求）进行样本的制备。该27色Panel，识别T细胞、B细胞、髓系细胞和其中的各种亚群，我们显示StarBright染料可以轻松地用于多色免疫分析的高维度的Panel中。同时其中光谱高度相似的染料Brilliant Violet 510(BV510)和StarBright Violet 515(SBV515)，但足以进行准确的解析确保分析结果。

参考资料

Wade CG et al. (1979). Spectra of cells in flow cytometry using a vidicon detector. Histochem Cytochem 27, 1049-52.
Robinson JP et al. (2004). Collection hardware for high speed multispectral single particle analysis. Cytometry 59A, 12-12.
Robinson JP (2019). Spectral flow cytometry — Quo vadimus? Cytometry Part A 95, 823-824.

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* 本产品仅用于科研用途，不用于临床诊断。