科学资源

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  你问我答 | 如何高效分选免疫细胞

  常见问题1.ILC2分选有什么好方法啊？ILC2分选有人和小鼠物种区别，如果使用物种来源是鼠，STEMCELL有对应的EasySep™ Mouse ILC2 Enrichment Kit可以特定富集小鼠的ILC2，富集后纯度可以达到CD45+population的20%以上，另外对于ILC有全ILC富集盒EasySep™ Mouse Pan-ILC Enrichment Kit，纯度不是特别高，可以先富集，富集之后再进行后续培养或进一步流式分选，可以把流式分选时间减到十分钟左右，富集之后纯度可以达到50%。如果使用物种来源是人，ILC2有分选试剂盒EasySep™ Human ILC2 Isolation Kit，但是ILC2细胞本身在人血中的滴度比较低，一般不超过1%，所以如果要是从人血中分选ILC2的话，建议前期准备较多一点的血量，STEMCELL对于人的ICL2分选试剂盒效果非常不错，纯度大于90%，推荐大家使用。2. 想请教一下单核细胞分选?针对单核细胞分选，有两个负选盒子，EasySep™ Human Monocyte Enrichment Kit（产品号#19059）和EasySep™ Human Monocyte Isola...

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  GMP合规！SepMate (IVD) 入手了没

  从血液制备PBMCs（外周血单个核细胞）是分离特定免疫细胞亚群之前常见的一个步骤，最常用的PBMCs分选方法是搭配密度梯度离心液（如Lymphoprep™密度梯度离心液，密度为1.077g/mL）进行离心。SepMate™离心管可以轻松实现这一需求，帮助您快速又简便地从全血中分离PBMCs。SepMate™离心管包含一个特色插件，承担屏障作用可以将血液与离心液分隔开，离心后泾渭分明，只需要简单倾倒便能收集到高质量的PBMCs，全程仅需15分钟！SepMate™离心管STEMCELL提供两种类型分离管供您选择，分别是SepMate™(RUO) 和SepMate™(IVD) ，您可以根据您的实验需求灵活选择。更新后的SepMate™(IVD) 在一些国家被注册为体外诊断（IVD）设备，应用于密度梯度离心方式从全血或骨髓中分离单个核细胞（MNCs）。SepMate™(IVD)离心管的生产符合现行药品生产质量管理规范（GMP），并且已通过无菌测试不会对样本造成污染。无需繁冗复杂的技术性操作，稀释—加样—离心—倾倒，短短几个步骤...

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  如何一次分选超100亿个细胞？

  有什么办法可以一次迅速分选1 x1010个细胞，甚至更多？购买昂贵的仪器设备？还是少量多次，忙碌一天？如果用流式细胞仪分选1 x1010个细胞，按照2 x 104个细胞/秒的速度，大约需要597,600秒，即9,960分钟抑或是166小时。整整两周的时间！这是完全无法想象的事情，也完全没有可行性。这个时候，英勇无比的EasySep细胞分选当仁不让的站了出来，大容量的细胞分选绝对是Easysep的强项，EasySep细胞分选磁极从分选体积上有5ml、15ml、50ml等多种规格，更有1-96样本灵活分选通量，甚至是RoboSepTM 自动高通量磁珠分选仪满足各种应用场景需求。以Easy 50 EasySep™Magnet 磁极为例，它一次可以支持一支含有0.5 - 20 x 108个细胞的50mL样本管分选。如果针对1 x1010细胞的分选，需要分成5次处理或同时使用5个磁极。而普通的细胞分选试剂盒最多支持1 x109个细胞的分选，分选1 x1010个细胞需要10个同规格的细胞分选试剂盒。于是STEMCELL Technologies 研发推出了Easy 250 Ea...

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  EasySep—反、正都能挑到合适的分选试剂盒

  EasySep是STEMCELL Technologies研发的一款高效快速的磁珠分选产品，专利产品四聚体抗体复合物赋予了其高效稳定的性能，结果易重复；适用范围广，满足不同需求；操作简便，可节约大量时间。“EasySep”顾名思义，取自“Easy Separation”，它的简便性，体现在只需要一块小巧轻便的磁极搭配一根试管，即可完成多种类型细胞的分选过程；它无需分选柱，无需提前裂解红细胞，在整个分选的流程中，依次加入特定量的抗体和磁珠，无需离心，洗涤，整个过程一气呵成，不仅能够达到高纯度分选细胞的要求，同时节约了成本和时间，结果稳定可控。从分选方式来看， EasySep产品线根据实验的需求，提供目前磁珠分选的主流方式，阳选和阴选试剂盒。磁珠分选阳选是利用抗原抗体结合的特异性，根据目的细胞表面表达的特异性抗原，利用其特异性抗体将目的细胞富集下来的分选方式。分选后的目的细胞，表面结合有抗体和磁珠，能够兼容下游多种实验。阳选分选方式，具备多种优势。纯...

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  细数细胞分选热门应用

  细胞是生命活动的最小单位，也是生命科学研究的基础。如果基础不可靠，再高大上的研究也是空中楼阁。经典的案例就是Hela细胞系的污染，导致众多知名科学家撤回高分文章。由此可知，高纯度的细胞是得出可靠结论的前提。获得目的细胞的技术方法多种多样，如何选择适合下游应用的分选方法呢？不同的细胞分选技术在分选时间、成本和效率上差异很大，在众多的细胞分选产品中，STEMCELL Technologies公司的EasySep操作简单、快速、成本低，可以获得高纯度、高活性的目的细胞，是广大研究者的首选。EasySep分选获得的高质量细胞，可以用于下游多种实验与应用，比如目前非常热门的单细胞测序、中和抗体与免疫细胞治疗等。一、新冠病毒中和抗体研究所谓青春能几年，疫情已三年。新冠仍然肆虐，除了疫苗，科学家也在努力的研究治疗新冠感染的方法，其中小分子特效药与中和抗体是两大研究热点。中和抗体的研究，需要从新冠康复患者的血液样本中大海捞针般的筛选分泌中和抗体...

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  细胞培养入门课 | 第三讲 ：hPSC的冻存与复苏

  在前两期的hPSC细胞培养入门课中，我们解答了以下主题的常见问题：第一讲：hPSC的获取与培养 >第二讲：hPSC的鉴定 >在建立了高质量的hPSC细胞系后，如何有效地保存珍贵的细胞系变得尤为重要。这次就让我们来看看冻存hPSC有哪些值得注意的要点。阅读完本文后，大家如果还有其他关于hPSC冻存的疑问，欢迎在文末留言，或通过以下方式联系STEMCELL技术助手，我们将汇总大家的问题进行统一解答！STEMCELL中国官方联系方式电话：400 885 9050邮件：info.cn@stemcell.com问题1：hPSC冻存有哪些冻存配方？答：hPSC冻存配方通常有两种，一种是含血清的传统冻存配方，通常含有10%DMSO和50 - 90% FBS，但血清成分不确定，且存在批次间差异较大的问题。另一种是不含血清的冻存配方（含DMSO），如mFreSR™ （#05855）, FreSR™-S（#05859）和cGMP级别的CryoStor® CS10（#07930），它们的成分确定，适合与成分确定的培养基配合使用，比如mTeSR™系列培养基（#85850；#1...

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  怎样选择体内用anti-PD-1抗体？

  Programmed death-1（PD-1）是在T细胞上表达的一种抑制性受体，可促进炎症性T细胞的凋亡并抑制抗炎性调节T细胞的凋亡，从而促进自我耐受性并预防自身免疫性疾病。为了逃避免疫系统的监视，肿瘤细胞经常通过过度表达PD-L1来与PD-1结合并激活PD-1。抗PD-1单克隆抗体用于阻断PD-L1与PD-1的结合，从而使免疫系统能够发现并杀死肿瘤细胞。不同克隆号比较:BioXcell提供三种不同克隆号的anti-mouse PD-1抗体：RMP1-14, 29F.1A12和J43。三种克隆号的作用机制相同，都与PD-L1竞争结合PD-1位点，从而阻断PD-1信号，但应用方向有所差异。其中BE/BP0273，29F.1A12具有更广泛的、有文献记录的多类抗体应用方向，能多方面满足您的实验需求。在官网产品页面可查询参考文献，寻找适合您的动物实验模型、实验方法、抗体浓度、抗体应用方向等。不同克隆号具体差别如下：所有BioXcell的抗体，包括上述anti-PD-1各克隆号产品都经过严格质量检测，保证其不含鼠源病原体，内毒素水平小...

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  Star Bright星光染料点亮光谱流式

  光谱流式的概念于1979年首次提出1并于2004年首次公开了功能性的光谱流式2，随后2007年Purdue大学获得了光谱流式的专利3。传统流式的光电设计理念是，根据激光激发的荧光染料发射谱图设计滤光片组合，特定波长的荧光分配到特定检测器。而光谱流式，反其道而行之，使用棱镜来收集穿过检测器阵列的所有发射光，而后使用复杂的算法区分不同的荧光信号，以分离和识别每个荧光染料。光谱流式的一个优势是能同时使用峰值发射相似的荧光染料，只要荧光染料的整个光谱有明显的特征。StarBright星光染料是一种新型荧光纳米颗粒，它们专为流式细胞术开发，无需特殊的染色缓冲液，可用于所有常见的染色缓冲液，稳定性好并且批次间一致性好，适合所有流式细胞仪器，包括光谱流式细胞仪。在这里，将会展示StarBright独特的光谱特性如何成为光谱流式的理想选择，从而使多色Panel设计拥有更多选择和新的染料组合。图1. StarBright 染料的光谱图。StarBright染料偶联的抗体在四激...

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  IntestiCult™构建人结直肠癌类器官和免疫细胞共培养

  今天和大家分享的文献是同济大学附属第十人民医院院长秦环龙课题组发表在Nature子刊：Signal Transduction and Targeted Therapy(IF=18.19)上的最新研究成果——具核梭杆菌可提高PD-L1拮抗疗法对抗结直肠癌的效果 (Fusobacterium nucleatum enhances the efficacy of PD-L1 blockade in colorectal cancer) ¹。文章亮点是当下热门的肿瘤类器官和免疫细胞共培养。值得一提的是，该课题组使用了STEMCELL人肠类器官商业化培养基IntestiCult™ Organoid Growth Medium (Human)(#06010) 来建立结直肠癌病人样本来源的3D肠类器官培养体系。研究背景免疫疗法是抗肿瘤研究领域的一大热门话题，其中通过拮抗T细胞抑制性受体PD-1及其配体PD-L1来间接激活抗肿瘤免疫反应的疗法，已在临床上一些常见癌症亚型的治疗中取得了显著的成果²⁻⁵。然而，抗PD-1/PD-L1疗法对大多数结直肠癌病人却没有很好的疗效，仅在少数具有肿瘤微卫星不稳定（MSI-high）和高突变负担的病人中有...

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  技术方案 | 使用HepatiCult™类器官生长培养基复苏和扩增人肝脏类器官

  正确复苏冷冻保存的类器官可以极大地增加类器官的复苏活率。以下是使用HepatiCult™生长培养基 (人)复苏和扩增培养冻存的肝脏类器官的方案。目录所需耗材及试剂准备工作操作步骤所需耗材及试剂冷冻保存的人肝类器官HepatiCult™生长培养基(人)(目录号#100-0385)DMEM/F-12+15 mM HEPES（目录号#36254)25%牛血清白蛋白水溶液（FBS）Corning® Matrigel® (Corning 356231，≥8mg/mL protein)无菌磷酸盐缓冲盐水 (PBS)5 mg/mL庆大霉素15 mL锥形管 (目录号#38009)24孔板（Tissue culture-treated） (目录号#38017)6孔板（Tissue culture-treated） (目录号#38015)无菌的200 mL和1000 mL枪头10 mL和25 mL移液管 (目录号#38004和#38005)装有冰块的泡沫盒装有干冰的泡沫盒细胞培养箱准备工作1. 在2-8°C下过夜解冻HepatiCult™类器官生长添加物，制备完整的Hepaticult™类器官生长培养基 (OGM):5 mL Hepaticult™ Organoid Growth Supplement94 mL HepatiCult™ Organo...

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  二抗细则助你优化检测系统

  注重二抗来优化实验，是获得精确结果的关键步骤。为确保成功，来听听Bio-Rad二抗专家的建议吧。No.1二抗的克隆性多克隆抗体——通常在山羊、兔子、绵羊或驴身上产生，这些抗体能识别所针对抗体的许多不同表位。当多个二抗和同一个一抗结合时，信号被放大。单克隆抗体——通常在小鼠或大鼠体内产生，它们识别所针对的抗体上的单一表位，因此不会产生信号放大。No.2二抗的靶点类别IgG、IgA、IgD、IgE和IgM。同型针对小鼠IgG的多克隆二抗将倾向于与最常见的同型反应，本例中为IgG1。为了获得一个更稀有的同型的更强的信号，比如IgG2b，选择一个针对这个同型的特异性的次级是有利的。比如同型为IgG1、IgG2a、IgG2b。链虽然一抗的哪一部分是二抗的表位通常并不重要，但如果有必要，可以选择针对重链或轻链特定区域的二抗。重链如Fc域或铰链区域，轻链如kappa或lambda。结合位置重要的是要考虑二抗在一抗上的结合位置。在二抗结合位点综述中，我们重点介绍了结合位点的...

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  二抗是个多面手，你是否了解它？

  何为二抗二级抗体识别一级抗体作为其靶抗原，而一级抗体又与其抗原或相关蛋白结合。与特异性结合到抗原结合域的抗独特型抗体不同，二级抗体特异性地结合到抗体的保守区域，该保守区域在特定类别的抗体（例如人IgG或小鼠IgM）中是恒定的。因此，二级抗体能够与一系列抗体克隆结合，使它们成为非常有效的研究工具。何时用二抗1.一级抗体检测二级抗体通常用于检测和可视化一级抗体的存在，如免疫印迹或免疫组化。在这些应用中，二级抗体用报告分子标记，报告分子可以是酶HRP或荧光团如FITC。多个二级抗体可以结合到一个单一的一级抗体，提高灵敏度和放大信号（如图）。如果需要，可以通过使用未标记的二级抗体和标记的三级抗体来实现进一步的信号放大。有关实验设计及实验优化，且听我们下回分解。2.抗体捕获通过定量ELISA的方法，无标记的二级抗体可用于从生物溶液中捕获感兴趣的抗体。例如，未标记的二级小鼠抗人IgG可用作从人血清样本结合人IgG的捕获抗体。然后...

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  Bio-Rad抗独特型抗体，加速生物药研发

  新型抗体药物和生物仿制药的研发离不开抗独特型抗体的使用，Bio-Rad抗独特型抗体使用独特的HuCAL技术开发，提供不同类型、不同标记的全人源抗独特型单克隆抗体，加速新型生物药研发。抗体的独特型抗体的独特型(idiotype ,ID) 即位于抗体分子可变区的抗原决定簇, 是位于抗体可变区内高变区的遗传标志。本质上, ID的差异是由抗体轻链可变区(VL) 和抗体重链可变区(VH) 内高变区氨基酸序列不同所致。这种氨基酸序列的差异也是抗体特异性的分子基础, 不同特异性的抗体分子其独特型也不同。独特型由若干表位组成, 称为独特位(idiotope) , 它可刺激机体产生相应的抗体, 即抗独特型抗体(Anti-idiotypic Antibody , Anti-ID)。抗体独特型的提出离不开“免疫网络学说”的产生。丹麦免疫学家Jerne 于1974 年提出了在独特型决定簇与抗独特型决定簇之间相互识别、相互作用基础上的“免疫网络学说”(Immune Network Theory) 。该学说在承认细胞系选择学说的基础上, 认为免疫应...

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  流式小技巧(一)如何进行抗体滴定?

  Q为什么要进行抗体滴定？在进行流式实验时，商业化抗体都会有一个推荐用量，一般都是过量的。染色时抗体会结合高亲和力的目标抗原。当抗体过量太多时，也会结合低亲和力的抗原，造成背景增高，分辨率下降。因此，我们推荐实验前进行抗体滴定，不仅节省抗体用量，更是为了优化染色方案，得到分辨率更好的结果。Q如何进行抗体滴定？进行抗体滴定前，先要固定一个实验条件，包括孵育时间、孵育温度和细胞类型等。这些实验条件最好和最终的实验条件一致。在抗体滴定时，最好加入细胞死活染料，因为死细胞会产生非特异染色，造成结果无法分析。将细胞和一系列浓度的抗体进行染色，用染色指数（Stain Index）确定最佳抗体浓度。计算Stain Index，需要有阴性群体和阳性群体（如图1），如果你的细胞只有阳性群体，比如人外周血CD45都是阳性的，可以掺入一些未染色的细胞。另外，针对所有的流式实验，不要忘记用单细胞门去除黏连细胞。图1. 染色指数的计算.染色指数（Sta...

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  轻松上手多色实验 — 无需补偿的多色panels

  4色无补偿Panels要做多色流式实验，荧光如何搭配、荧光补偿调节都是令人费神费力的事。因此，对于人和小鼠外周血常用的细胞表面marker, 如T细胞、B细胞、NK、骨髓细胞群、记忆细胞、naïve和活化细胞，Bio-Rad已经优化出多个4色无补偿panels，让您实验轻松上手。人细胞免疫表型分析4色panelsT, B and myeloid cellsHelper and cytotoxic T cellsActivated T cellRegulatory T cellMemory and naïveT cellsMemory and naïve B cellsTransitional B cell and plasmablastClass switched memory B cellNK panel 1NK panel 2小鼠细胞免疫表型分析4色panelsT, B and myeloid cellsT, B, NK and myeloid cellsT helperand T cytotoxicActivated T cellsB cellsNaïve and memory B cellsNK and NKT cellsMyeloid Cell Panel

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  用TidyBlot解决IP实验后Western Blot背景问题

  TidyBlot二抗（HRP标记）可以特异性的与非变性的抗体结合，消除Western Blot实验样品中存在的IgG干扰。而传统二抗则会结合样品中的变性IgG，导致Western Blot背景过高。样品中变性IgG的来源可能是免疫沉淀（IP）及免疫共沉淀（Co-IP）过程中从Beads上脱落的抗体，或者脾脏/肝脏样品中本身含有的IgG。这些样品中存在的IgG会在约25kD和50kD的位置形成背景条带，影响目的条带的检测。TidyBlot二抗优势：●仅结合完整结构的非变异性IgG，不会受样品中存在的IgG干扰●可以直接代替传统二抗使用，不存在特殊实验步骤●TidyBlot可结合常用的的单抗或多抗，并带有HRP标记，不需要额外的标记试剂泳道2：TidyBlot不会结合样品中本身存在的IgG，IgG的轻链与重链不会影响目的条带检测泳道5、6：传统二抗会识别轻链与重链，影响目的蛋白检测TidyBlot对一抗的兼容性：

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  产品百科 | Antibodies to Biotherapeutics——HuCAL® 体外单克隆抗体生产技术

  Bio-Rad 利用独特的HuCAL® 体外单克隆抗体生产技术，开发出许多高特异性、高亲和力的抗 Biotherapeutic 及抗生物制品的抗体，用于支持创新药和生物仿制药的临床前研究、临床试验和病人用药监控。我们拥有业界领先的针对已上市的治疗用单克隆抗体药物的一系列抗体，也提供针对您候选蛋白质药物定制抗体服务，用于候选药物的 PK 及其它检测实验。HuCAL®体外单克隆抗体的特点：◆大量应用数据和 protocol 支持药物代谢动力学(PK)、抗药物抗体(ADA)和中和实验◆高特异性和高灵敏度，用于实验条件的优化◆针对药物/靶标复合物的特异抗体◆HRP 偶联抗体用于 ELISA 检测◆完全采用人源免疫球蛋白作为ADA抗药物抗体实验的对照和校准◆无限制的稳定供应贯穿整个临床前和临床试验过程抗抗体药物的抗体结合模式我们经过独特设计，开发出三种类型的抗抗体药物的抗体：使用不同类型抗体进行检测的模式使用高特异性、高亲和力的 Type 1，Type 2 和Type 3 抗体，检测开发变得...

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  Anti-Etanercept体外重组单克隆抗体

  2017年6月，Bio-Rad的“ Antibodies to Biotherapeutics”体外重组单克隆抗体家族迎来新成员：Anti-Etanercept antibodies。Etanercept，医学名为“依那西普”，可结合TNFalpha和TNF beta (Lymphotoxin A)，其作为TNF的抑制剂可用于治疗自身免疫性疾病。Etanercept由Amgen和Pfizer以商品名Enbrel®共同上市，被广泛用于治疗类风湿性关节病，青少年类风湿病和牛皮癣关节炎，斑块性银屑病和强直性脊柱炎，是市场上销量非常好的生物治疗药物之一。该药物的专利于2015年在欧洲过期，并将于2028年在美国过期（授予新专利后），目前已有多家公司披露了生物仿制药的开发。基于此，Bio-Rad公司利于专利的HuCAL®体外单克隆抗体生产技术，开发了针对Etanercept相关的生物仿制药研究的体外重组单克隆抗体。Etanercept是一种二聚融合蛋白，由与人IgG1的Fc部分连接的人75kDa（p75）肿瘤坏死因子受体（TNFR2）的细胞外配体结合部分组成的。其中，人IgG1的Fc部分含有CH2结构域...

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  hFAB™罗丹明直标一抗

  hFABTM罗丹明直标一抗是一种全新的Western Blot荧光标记抗体，此类抗体用于荧光检测看家蛋白，使用这类抗体作为荧光一抗，您不用担心与其他一抗或二抗的交叉反应，非常适合多色荧光Western Blot实验。hFABTM罗丹明直标一抗使用Fab段的人源化抗体，并非传统的完整结构抗体，以减少与抗原结合时的空间位阻，增加抗体结合量，提高灵敏度。罗丹明染料标记在Fab段抗体上，作为荧光检测时的发光分子。hFABTM罗丹明直标一抗带有荧光染料，所以省去了孵育二抗的步骤。除此之外其还有其他优势：1.因hFABTM罗丹明直标一抗为人源化抗体，而通常Western Blot实验使用的抗体种属为小鼠、大鼠、兔、山羊等动物，故与hFABTM罗丹明直标一抗不会产生交叉反应，在选择其他目的蛋白抗体时，基本上不用考虑是否与抗看家蛋白抗体有交叉反应，从而令多色荧光实验操作变得非常简单。2.可兼容使用700nm及800nm近红外荧光染料，将700nm与800nm荧光通道留给目的蛋白检测使用。700nm与800nm...

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  StarBright™ B700超级荧光染料

  StarBright Blue 700是一种有别于传统荧光染料的新型染料，可以用在各种荧光标记实验中，目前Bio-Rad推出了该染料标记的二抗产品，主要用于荧光Western Blot实验。StarBright染料是一种包裹有多个光吸收/光发射的聚合物，与传统染料分子相比，该分子结构具有更高的光量子产率。光吸收单体（蓝色球标示）可以吸收470nm的激发光，然后将能量传递给能量转移单体（绿色球标示），再将能量传递给发光单体（红色球标示）。最后发光单体放出700nm近红外荧光。这种激发与发射模式的好处有：1.更高的激发光能量。通常700nm近红外染料的激发波长为650nm左右。使用470nm激发，可以获得更高的激发能量。2.更低的激发光干扰。StarBright染料激发光与发射光相差200nm以上，激发光很容易被发射滤光片滤掉，所以荧光背景会更低。通常染料的激发光与发射光波长差（称为斯托克斯位移）在50nm左右，激发光有可能会漏到检测中，造成较高的荧光背景。3.更高的灵敏度。使用StarBright荧...

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  PrecisionAb™抗体—完美免疫印迹的选择

  Bio-Rad的免疫印迹专家与抗体专家携手开发了PrecisionAb抗体。这些优质的抗体为WB提供了卓越的性能和重现性，帮助您获得完美的WB结果。抗体性能每一种PrecisionAb抗体都经过严格的测试筛选出来的:●高特异性—针对12种细胞系进行验证并根据严格的性能指标筛选；●高灵敏度—检测内源而非高表达的靶标蛋白；●高一致性—每批抗体符合相同的严格质量控制标准产品规格产品规格包括小包装、带有对照的抗体以及单独抗体三种规格。阳性对照是未处理的总细胞裂解物，其可以用于：●验证实验室中免疫印迹的流程●从非特异性条带中区分目的蛋白条带靶标蛋白PrecisionAb抗体的主要靶标蛋白包括大部分细胞信号通路的常见蛋白, 涉及癌症和神经学研究的较多。PrecisionAb抗体的验证标准PrecisionAb抗体是在实验室利用行业内非常严苛的验证标准进行评估，以确保其在行业内领先的性能和重现性。每种PrecisionAb抗体经科研人员针对目的蛋白在细胞(多达12种细胞系)的内源表达水平...

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  TidyBlot™二抗上，重链轻链一扫光

  做IP实验，很烦人的就是最后一步洗脱时IP抗体也掉下来，然后WB的结果上就粗粗的一条重链信号（~50 kDa），一条轻链信号（~25 kDa），尤其是目标蛋白的大小也正好在这两个分子量附近时，都搞不清到底是谁的信号。TidyBlot (STAR209P) 是新型HRP偶联的二抗，它独特之处在于只结合native antibody天然抗体（非还原的）, 即WB实验中加入的一抗，不识别煮过的IP抗体的重链或轻链，这样就不会有干扰信号啦。图1：泳道2使用TidyBlot™二抗，只见目标蛋白Actin条带，一抗使用mouse anti-human actin gamma antibody (VMA00049)；泳道5，6使用常规anti-mouse二抗，重链轻链信号都出现了；泳道3和6没有加WB一抗它的另一个优点是广谱性。适用多个种属来源的单抗和多抗，不用买多个HRP偶联的二抗了，省钱啦！图2： TidyBlot™ 分别检测goat, rabbit和sheep IgG多抗。三种目标蛋白分别是HeLa(YAP1和mTOR)、Hek293 (NFkappaB p65)，使用的一抗分别是Goat anti-YAP1 ( VPA00104...

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  肿瘤抑制基因 肿瘤抑制蛋白表征抗体

  原癌基因和肿瘤抑制基因的突变在多数肿瘤的发生发展中扮演着重要角色。原癌基因倾向于编码生长因子、生长因子受体、细胞信号蛋白及转录因子；肿瘤抑制基因倾向于编码细胞周期调控因子。多数原癌基因通过点突变、基因扩增及迁移被激活，同时导致基因表达水平或蛋白活性水平的改变（Lodish et al. 2000）。与原癌基因相比，肿瘤抑制基因的突变是隐形的，这些基因遵循Knudson或“multiple-hit hypothesis”原则，根据此原则，需要等位基因都发生突变才会引发疾病的过程。尽管只是假说，特定肿瘤抑制基因的等位基因突变，例如BRCA1和BRCA2等位基因突变将会极大增加乳腺癌和卵巢癌的发病风险。例如携带BRCA1等位基因突变的妇女罹患乳腺癌的风险概率为60-90%，罹患卵巢癌的概率为40-60%（NHS UK）。根据这些增加的癌症罹患风险，对那些有家族乳腺癌病史的人进行BRCA1、BRCA2、TP53和PTEN等位基因突变检测是有一定预测意义的。Bio-Rad可提供肿瘤抑制基因相关分析的绝大...

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  细胞培养入门课 | 第二讲：hPSC的鉴定

  上一期hPSC细胞培养入门课中的同学在STEMCELL技术助手的帮助下已经成功建立起了iPSC细胞系。这次，他在hPSC的鉴定上出现了一些疑问，就让我们一起来看看这些问题该如何解决吧！问题1：什么情况下需要对hPSC进行质量鉴定？答：我们建议在以下几种情况下都需要及时对hPSC进行鉴定：1、体细胞重编程为iPSC后：由于早期的iPS细胞尚未完全重新编程或稳定（例如表观遗传学变化、DNA 损伤等），它们可能暂时无法有效地进行分化，因此可能需要进一步培养传代，建议培养到第15代后，再进行质量鉴定，来确认您重编程的细胞是否已经具有iPSC的特征与分化潜能。2、hPSC长期在体外维持培养：在hPSC长期在体外传代后，部分细胞可能出现染色体和遗传变异，而异常的hPSC亚群可能会出现生长优势，从而影响整个细胞系，因此我们推荐在连续维持培养每十代左右就及时对细胞系进行鉴定。3、hPSC形态、增殖、分化能力等出现异常时：hPSC在体外生长时是有分化倾向的，能够分化成三个胚层...

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  细胞培养入门课 | 第一讲：hPSC的获取与培养

  近日，某同学所在课题组打算用hPSC作为模型研究某个遗传疾病的机理，但他没有任何hPSC的培养基础，于是联系了我们经验丰富的STEMCELL技术助手来解答。他的问题很有代表性，我们在此将问答内容作为“细胞培养入门课”的第一讲分享给大家。 问题1：我想培养人多能干细胞（hPSC）并对其进行目的基因敲除来模拟某个遗传疾病，但是要怎样获得hPSC细胞系呢？答：1998年，威斯康星大学教授詹姆斯·汤姆森（James Thomson）等人第一次成功建立了人类胚胎干细胞系，包括H1, H7, H9等等都是在科研领域常用的胚胎干细胞系，可以在细胞库购买。问题2：但是我找了好多途径都买不到，我是否能够直接将病人的体细胞诱导为iPSC？答：当然，你也可以尝试通过引入外源的重编程关键基因（OCT4, SOX2, KLF4, c-Myc等）进行体细胞重编程，目前使用比较多的是成纤维细胞重编程（#05930）、血细胞重编程、尿源细胞重编程等。点击链接查看ReproRNA™-OKSGM试剂盒的重编程方法与效率>...

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  CryoStor®：cGMP级别标准生产的万能冻存液

  无论您目前还处在细胞治疗的研究阶段，还是正在将您的细胞治疗产品推向临床，选择一款安全可靠的细胞冻存液都至关重要。由BioLife Solutions生产，STEMCELL Technologies经销的CryoStor®，是以cGMP级别标准生产的、无蛋白、无血清的细胞冻存液，成分符合美国药典（USP）的要求，复苏率高，适配多种细胞类型，也适用于临床级别细胞和特殊珍贵细胞的冻存。 CryoStor®帮助您应对细胞治疗走向临床过程中的各种挑战使用经过验证的方法冻存细胞是细胞疗法开发和产品化的关键环节，能够为进一步质控留出时间，也为患者接受输注治疗提供了更高的安全保障和日程安排上的灵活性。然而在这个环节我们通常会遇到两个挑战：第一是冻存-复苏后的细胞是否能保持高活率并保留其表型和治疗功能；第二是冻存液的质量标准级别是否满足临床申报的合规要求和临床的安全性需求。如果您正在寻找一款效果经过充分验证、无动物源成分并在cGMP级别下生产的细胞冻存液，我们提供的CryoSt...

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  人多能干细胞培养技术贴士

  问题 1：细胞培养过程中过度分化（>20%）确保您的完全培养基（如：mTeSR™ Plus或mTeSR™1）在2-8°C下的保存时间小于两周。确保在细胞传代之前去除掉已分化的区域。避免培养板放置在细胞培养箱外的单次时间超过15分钟。确保细胞传代后获得的细胞团块大小均一。确保当大部分克隆生长至较大、致密而且中心较边缘密度更大时及时传代，不要生长过度。减少细胞传代时铺板的细胞团块数量来降低克隆密度。减少用ReLeSR™细胞传代时的孵育时间，因为有些细胞系会非常敏感。问题 2：使用ReLeSR™时获得的细胞团块大小不理想如果获得了比较大的细胞团块（比如，平均大小大于200um）-上下吹打细胞团块时，避免产生单细胞。-延长1-2分钟的孵育时间。如果获得了比较小的细胞团块（比如，平均大小小于50um）-减少消化后对细胞团块的操作。-缩短1-2分钟的孵育时间。问题 3：使用ReLeSR™时，已分化细胞与克隆一起被消化下来减少1-2分钟ReLeSR™的孵育时间。孵育温度改至室温...

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  如何长期维持培养分化后的人肠类器官？

  众所周知，人肠类器官的培养与小鼠类器官不同，如需获得终末分化的细胞类型，如肠内分泌细胞、杯状细胞等，需将建立好的肠类器官培养体系转化至分化培养基进行分化。而大部分疾病建模需在分化成熟的肠类器官中进行，如研究炎症性肠病（IBD）、药物转运、营养物质的吸收与代谢以及对肠病药物进行筛选等。但是，分化后，类器官中LGR5+的肠干细胞的含量显著降低，且不可逆，因此如何延长分化后的类器官的培养时间至关重要。而STEMCELL推出的IntestiCult™类器官分化培养基（人，简称ODM）全新上市！该培养基为完全培养基，支持在3D或2D中以单层或气液界面（ALI）培养形式进一步分化肠类器官，以3D方式分化后的肠类器官具有更明显的出芽状结构（图1）。起始细胞可以是衍生自人肠隐窝的肠类器官，也可以是已经在IntestiCult™类器官生长培养基（人，简称OGM）中培养传代的肠类器官。并且，在IntestiCult™ODM中分化后的肠类器官可在ALI条件下培养10周以上，显著高于常...

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  如何从脐带血中分离高纯度的CD34+细胞

  您是否遇到过这样的血液样本：存放时间超过24h，离心后有类似血块的红细胞凝集？是的，我们遇到了这样的脐带血样本。当我们知道采集的血样已经在室温存放超过24h以上时，我们很有信心可以分离到高纯度的CD34+细胞。可是当我们对血液样本进行多次离心后，仍然发现了大量的红细胞残留，我们都快哭了！最终，我们从样本中分别得到了纯度为95.01%和75.95%的CD34+细胞。有点小激动！一起来看看怎么回事吧！案例样本情况样本A：100 mL脐带血样本B：70 mL脐带血样本A和B均被储存在室温下超过24小时。选用试剂EasySep™缓冲液（产品号 #20144）Lymphoprep™（产品号 #07801）SepMate™-50（产品号 #86450）台盼蓝计数液（产品号 #07050）Anti-human CD34 PE抗体“The Big Easy”银色磁极（产品号 #18001）14 mL聚苯乙烯圆底管（产品号 #38008）实验结果样本A: 100 mL脐带血样本B: 70 mL脐带血样本A的起始样本为100 mL脐带血，预富集后的细胞数量为1 x 107 cells，分选后...

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  仅需15分钟，轻松分离PBMC

  PBMC中有淋巴细胞（T细胞、B细胞和NK细胞），单核细胞和树突状细胞等，被定义为有圆形细胞核的白细胞。从血液制备PBMC是分离特定免疫细胞亚群之前常见的一个步骤。最常用的PBMC分选方法是使用密度梯度离心液（比如：Lymphoprep™密度梯度离心液，密度为1.077 g/mL）进行离心。听起来似乎很简单，但是您可能会遇到各种复杂的情况。今天我们就来具体聊一聊如何从全血、脐带血以及骨髓分离PBMC。从全血分离PBMC从全血中分离PBMC是最常见的一种情况。一般来说，如果使用普通的离心管进行PBMC的分离，大概需要60分钟左右，并且在此过程中需要小心的进行加样，以避免样本与密度梯度离心液混合（图1）。 图1. 使用普通离心分离PBMC的标准流程而通过的SepMate™离心管进行PBMC分离，只需要短短的15分钟，仅通过简单的倾倒即可得到PBMC。这是因为SepMate™管内部含有一个独特的插件，能够防止血液与离心液的混合，以便将血液快速移液或倾倒于密度梯度离心液之上。具体操作...

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  短至6分钟，从原代组织去除死细胞

  从组织分选细胞时，需要通过机械或酶解离的方法预先消化组织。在这个过程中，通常会导致最终得到的单细胞悬液中存在很多死细胞。这些死细胞与抗体的非特异性结合以及死细胞自体荧光，会影响随后的流式分析。并且死细胞释放的因子也会干扰下游的检测，增加对原代组织研究的难度。在细胞凋亡期间，细胞膜失去其依赖能量的磷脂不对称性，导致带负电荷的磷脂暴露于细胞表面。磷脂酰丝氨酸（PS）从细胞膜内侧迁移到细胞膜表面是细胞凋亡的公认标志。因此使用与PS高亲和力特异性结合的Annexin V (AnxV) 将其标记，再通过免疫磁珠的方法可快速地去除死细胞。今天小编就来和大家聊聊如何通过免疫磁珠分选的方法快速去除死细胞。实验方法单细胞悬液的制备多形核白细胞（PMN）：将全血离心后，去除单个核细胞层，并使用氯化铵裂解沉淀，即可得到PMN。接着PMN被培养在RPMI + 10% FBS中，37°C过夜。小鼠肺：首先将野生型C57BL/6小鼠的肺剪成小块，然后加入胶原酶/透明质酸酶...