抗体研究

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  怎样选择体内用anti-PD-1抗体？

  Programmed death-1（PD-1）是在T细胞上表达的一种抑制性受体，可促进炎症性T细胞的凋亡并抑制抗炎性调节T细胞的凋亡，从而促进自我耐受性并预防自身免疫性疾病。为了逃避免疫系统的监视，肿瘤细胞经常通过过度表达PD-L1来与PD-1结合并激活PD-1。抗PD-1单克隆抗体用于阻断PD-L1与PD-1的结合，从而使免疫系统能够发现并杀死肿瘤细胞。不同克隆号比较:BioXcell提供三种不同克隆号的anti-mouse PD-1抗体：RMP1-14, 29F.1A12和J43。三种克隆号的作用机制相同，都与PD-L1竞争结合PD-1位点，从而阻断PD-1信号，但应用方向有所差异。其中BE/BP0273，29F.1A12具有更广泛的、有文献记录的多类抗体应用方向，能多方面满足您的实验需求。在官网产品页面可查询参考文献，寻找适合您的动物实验模型、实验方法、抗体浓度、抗体应用方向等。不同克隆号具体差别如下：所有BioXcell的抗体，包括上述anti-PD-1各克隆号产品都经过严格质量检测，保证其不含鼠源病原体，内毒素水平小...

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  Star Bright星光染料点亮光谱流式

  光谱流式的概念于1979年首次提出1并于2004年首次公开了功能性的光谱流式2，随后2007年Purdue大学获得了光谱流式的专利3。传统流式的光电设计理念是，根据激光激发的荧光染料发射谱图设计滤光片组合，特定波长的荧光分配到特定检测器。而光谱流式，反其道而行之，使用棱镜来收集穿过检测器阵列的所有发射光，而后使用复杂的算法区分不同的荧光信号，以分离和识别每个荧光染料。光谱流式的一个优势是能同时使用峰值发射相似的荧光染料，只要荧光染料的整个光谱有明显的特征。StarBright星光染料是一种新型荧光纳米颗粒，它们专为流式细胞术开发，无需特殊的染色缓冲液，可用于所有常见的染色缓冲液，稳定性好并且批次间一致性好，适合所有流式细胞仪器，包括光谱流式细胞仪。在这里，将会展示StarBright独特的光谱特性如何成为光谱流式的理想选择，从而使多色Panel设计拥有更多选择和新的染料组合。图1. StarBright 染料的光谱图。StarBright染料偶联的抗体在四激...

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  二抗细则助你优化检测系统

  注重二抗来优化实验，是获得精确结果的关键步骤。为确保成功，来听听Bio-Rad二抗专家的建议吧。No.1二抗的克隆性多克隆抗体——通常在山羊、兔子、绵羊或驴身上产生，这些抗体能识别所针对抗体的许多不同表位。当多个二抗和同一个一抗结合时，信号被放大。单克隆抗体——通常在小鼠或大鼠体内产生，它们识别所针对的抗体上的单一表位，因此不会产生信号放大。No.2二抗的靶点类别IgG、IgA、IgD、IgE和IgM。同型针对小鼠IgG的多克隆二抗将倾向于与最常见的同型反应，本例中为IgG1。为了获得一个更稀有的同型的更强的信号，比如IgG2b，选择一个针对这个同型的特异性的次级是有利的。比如同型为IgG1、IgG2a、IgG2b。链虽然一抗的哪一部分是二抗的表位通常并不重要，但如果有必要，可以选择针对重链或轻链特定区域的二抗。重链如Fc域或铰链区域，轻链如kappa或lambda。结合位置重要的是要考虑二抗在一抗上的结合位置。在二抗结合位点综述中，我们重点介绍了结合位点的...

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  二抗是个多面手，你是否了解它？

  何为二抗二级抗体识别一级抗体作为其靶抗原，而一级抗体又与其抗原或相关蛋白结合。与特异性结合到抗原结合域的抗独特型抗体不同，二级抗体特异性地结合到抗体的保守区域，该保守区域在特定类别的抗体（例如人IgG或小鼠IgM）中是恒定的。因此，二级抗体能够与一系列抗体克隆结合，使它们成为非常有效的研究工具。何时用二抗1.一级抗体检测二级抗体通常用于检测和可视化一级抗体的存在，如免疫印迹或免疫组化。在这些应用中，二级抗体用报告分子标记，报告分子可以是酶HRP或荧光团如FITC。多个二级抗体可以结合到一个单一的一级抗体，提高灵敏度和放大信号（如图）。如果需要，可以通过使用未标记的二级抗体和标记的三级抗体来实现进一步的信号放大。有关实验设计及实验优化，且听我们下回分解。2.抗体捕获通过定量ELISA的方法，无标记的二级抗体可用于从生物溶液中捕获感兴趣的抗体。例如，未标记的二级小鼠抗人IgG可用作从人血清样本结合人IgG的捕获抗体。然后...

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  Bio-Rad抗独特型抗体，加速生物药研发

  新型抗体药物和生物仿制药的研发离不开抗独特型抗体的使用，Bio-Rad抗独特型抗体使用独特的HuCAL技术开发，提供不同类型、不同标记的全人源抗独特型单克隆抗体，加速新型生物药研发。抗体的独特型抗体的独特型(idiotype ,ID) 即位于抗体分子可变区的抗原决定簇, 是位于抗体可变区内高变区的遗传标志。本质上, ID的差异是由抗体轻链可变区(VL) 和抗体重链可变区(VH) 内高变区氨基酸序列不同所致。这种氨基酸序列的差异也是抗体特异性的分子基础, 不同特异性的抗体分子其独特型也不同。独特型由若干表位组成, 称为独特位(idiotope) , 它可刺激机体产生相应的抗体, 即抗独特型抗体(Anti-idiotypic Antibody , Anti-ID)。抗体独特型的提出离不开“免疫网络学说”的产生。丹麦免疫学家Jerne 于1974 年提出了在独特型决定簇与抗独特型决定簇之间相互识别、相互作用基础上的“免疫网络学说”(Immune Network Theory) 。该学说在承认细胞系选择学说的基础上, 认为免疫应...

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  流式小技巧(一)如何进行抗体滴定?

  Q为什么要进行抗体滴定？在进行流式实验时，商业化抗体都会有一个推荐用量，一般都是过量的。染色时抗体会结合高亲和力的目标抗原。当抗体过量太多时，也会结合低亲和力的抗原，造成背景增高，分辨率下降。因此，我们推荐实验前进行抗体滴定，不仅节省抗体用量，更是为了优化染色方案，得到分辨率更好的结果。Q如何进行抗体滴定？进行抗体滴定前，先要固定一个实验条件，包括孵育时间、孵育温度和细胞类型等。这些实验条件最好和最终的实验条件一致。在抗体滴定时，最好加入细胞死活染料，因为死细胞会产生非特异染色，造成结果无法分析。将细胞和一系列浓度的抗体进行染色，用染色指数（Stain Index）确定最佳抗体浓度。计算Stain Index，需要有阴性群体和阳性群体（如图1），如果你的细胞只有阳性群体，比如人外周血CD45都是阳性的，可以掺入一些未染色的细胞。另外，针对所有的流式实验，不要忘记用单细胞门去除黏连细胞。图1. 染色指数的计算.染色指数（Sta...

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  轻松上手多色实验 — 无需补偿的多色panels

  4色无补偿Panels要做多色流式实验，荧光如何搭配、荧光补偿调节都是令人费神费力的事。因此，对于人和小鼠外周血常用的细胞表面marker, 如T细胞、B细胞、NK、骨髓细胞群、记忆细胞、naïve和活化细胞，Bio-Rad已经优化出多个4色无补偿panels，让您实验轻松上手。人细胞免疫表型分析4色panelsT, B and myeloid cellsHelper and cytotoxic T cellsActivated T cellRegulatory T cellMemory and naïveT cellsMemory and naïve B cellsTransitional B cell and plasmablastClass switched memory B cellNK panel 1NK panel 2小鼠细胞免疫表型分析4色panelsT, B and myeloid cellsT, B, NK and myeloid cellsT helperand T cytotoxicActivated T cellsB cellsNaïve and memory B cellsNK and NKT cellsMyeloid Cell Panel

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  用TidyBlot解决IP实验后Western Blot背景问题

  TidyBlot二抗（HRP标记）可以特异性的与非变性的抗体结合，消除Western Blot实验样品中存在的IgG干扰。而传统二抗则会结合样品中的变性IgG，导致Western Blot背景过高。样品中变性IgG的来源可能是免疫沉淀（IP）及免疫共沉淀（Co-IP）过程中从Beads上脱落的抗体，或者脾脏/肝脏样品中本身含有的IgG。这些样品中存在的IgG会在约25kD和50kD的位置形成背景条带，影响目的条带的检测。TidyBlot二抗优势：●仅结合完整结构的非变异性IgG，不会受样品中存在的IgG干扰●可以直接代替传统二抗使用，不存在特殊实验步骤●TidyBlot可结合常用的的单抗或多抗，并带有HRP标记，不需要额外的标记试剂泳道2：TidyBlot不会结合样品中本身存在的IgG，IgG的轻链与重链不会影响目的条带检测泳道5、6：传统二抗会识别轻链与重链，影响目的蛋白检测TidyBlot对一抗的兼容性：

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  产品百科 | Antibodies to Biotherapeutics——HuCAL® 体外单克隆抗体生产技术

  Bio-Rad 利用独特的HuCAL® 体外单克隆抗体生产技术，开发出许多高特异性、高亲和力的抗 Biotherapeutic 及抗生物制品的抗体，用于支持创新药和生物仿制药的临床前研究、临床试验和病人用药监控。我们拥有业界领先的针对已上市的治疗用单克隆抗体药物的一系列抗体，也提供针对您候选蛋白质药物定制抗体服务，用于候选药物的 PK 及其它检测实验。HuCAL®体外单克隆抗体的特点：◆大量应用数据和 protocol 支持药物代谢动力学(PK)、抗药物抗体(ADA)和中和实验◆高特异性和高灵敏度，用于实验条件的优化◆针对药物/靶标复合物的特异抗体◆HRP 偶联抗体用于 ELISA 检测◆完全采用人源免疫球蛋白作为ADA抗药物抗体实验的对照和校准◆无限制的稳定供应贯穿整个临床前和临床试验过程抗抗体药物的抗体结合模式我们经过独特设计，开发出三种类型的抗抗体药物的抗体：使用不同类型抗体进行检测的模式使用高特异性、高亲和力的 Type 1，Type 2 和Type 3 抗体，检测开发变得...

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  Anti-Etanercept体外重组单克隆抗体

  2017年6月，Bio-Rad的“ Antibodies to Biotherapeutics”体外重组单克隆抗体家族迎来新成员：Anti-Etanercept antibodies。Etanercept，医学名为“依那西普”，可结合TNFalpha和TNF beta (Lymphotoxin A)，其作为TNF的抑制剂可用于治疗自身免疫性疾病。Etanercept由Amgen和Pfizer以商品名Enbrel®共同上市，被广泛用于治疗类风湿性关节病，青少年类风湿病和牛皮癣关节炎，斑块性银屑病和强直性脊柱炎，是市场上销量非常好的生物治疗药物之一。该药物的专利于2015年在欧洲过期，并将于2028年在美国过期（授予新专利后），目前已有多家公司披露了生物仿制药的开发。基于此，Bio-Rad公司利于专利的HuCAL®体外单克隆抗体生产技术，开发了针对Etanercept相关的生物仿制药研究的体外重组单克隆抗体。Etanercept是一种二聚融合蛋白，由与人IgG1的Fc部分连接的人75kDa（p75）肿瘤坏死因子受体（TNFR2）的细胞外配体结合部分组成的。其中，人IgG1的Fc部分含有CH2结构域...

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  hFAB™罗丹明直标一抗

  hFABTM罗丹明直标一抗是一种全新的Western Blot荧光标记抗体，此类抗体用于荧光检测看家蛋白，使用这类抗体作为荧光一抗，您不用担心与其他一抗或二抗的交叉反应，非常适合多色荧光Western Blot实验。hFABTM罗丹明直标一抗使用Fab段的人源化抗体，并非传统的完整结构抗体，以减少与抗原结合时的空间位阻，增加抗体结合量，提高灵敏度。罗丹明染料标记在Fab段抗体上，作为荧光检测时的发光分子。hFABTM罗丹明直标一抗带有荧光染料，所以省去了孵育二抗的步骤。除此之外其还有其他优势：1.因hFABTM罗丹明直标一抗为人源化抗体，而通常Western Blot实验使用的抗体种属为小鼠、大鼠、兔、山羊等动物，故与hFABTM罗丹明直标一抗不会产生交叉反应，在选择其他目的蛋白抗体时，基本上不用考虑是否与抗看家蛋白抗体有交叉反应，从而令多色荧光实验操作变得非常简单。2.可兼容使用700nm及800nm近红外荧光染料，将700nm与800nm荧光通道留给目的蛋白检测使用。700nm与800nm...

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  StarBright™ B700超级荧光染料

  StarBright Blue 700是一种有别于传统荧光染料的新型染料，可以用在各种荧光标记实验中，目前Bio-Rad推出了该染料标记的二抗产品，主要用于荧光Western Blot实验。StarBright染料是一种包裹有多个光吸收/光发射的聚合物，与传统染料分子相比，该分子结构具有更高的光量子产率。光吸收单体（蓝色球标示）可以吸收470nm的激发光，然后将能量传递给能量转移单体（绿色球标示），再将能量传递给发光单体（红色球标示）。最后发光单体放出700nm近红外荧光。这种激发与发射模式的好处有：1.更高的激发光能量。通常700nm近红外染料的激发波长为650nm左右。使用470nm激发，可以获得更高的激发能量。2.更低的激发光干扰。StarBright染料激发光与发射光相差200nm以上，激发光很容易被发射滤光片滤掉，所以荧光背景会更低。通常染料的激发光与发射光波长差（称为斯托克斯位移）在50nm左右，激发光有可能会漏到检测中，造成较高的荧光背景。3.更高的灵敏度。使用StarBright荧...

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  PrecisionAb™抗体—完美免疫印迹的选择

  Bio-Rad的免疫印迹专家与抗体专家携手开发了PrecisionAb抗体。这些优质的抗体为WB提供了卓越的性能和重现性，帮助您获得完美的WB结果。抗体性能每一种PrecisionAb抗体都经过严格的测试筛选出来的:●高特异性—针对12种细胞系进行验证并根据严格的性能指标筛选；●高灵敏度—检测内源而非高表达的靶标蛋白；●高一致性—每批抗体符合相同的严格质量控制标准产品规格产品规格包括小包装、带有对照的抗体以及单独抗体三种规格。阳性对照是未处理的总细胞裂解物，其可以用于：●验证实验室中免疫印迹的流程●从非特异性条带中区分目的蛋白条带靶标蛋白PrecisionAb抗体的主要靶标蛋白包括大部分细胞信号通路的常见蛋白, 涉及癌症和神经学研究的较多。PrecisionAb抗体的验证标准PrecisionAb抗体是在实验室利用行业内非常严苛的验证标准进行评估，以确保其在行业内领先的性能和重现性。每种PrecisionAb抗体经科研人员针对目的蛋白在细胞(多达12种细胞系)的内源表达水平...

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  TidyBlot™二抗上，重链轻链一扫光

  做IP实验，很烦人的就是最后一步洗脱时IP抗体也掉下来，然后WB的结果上就粗粗的一条重链信号（~50 kDa），一条轻链信号（~25 kDa），尤其是目标蛋白的大小也正好在这两个分子量附近时，都搞不清到底是谁的信号。TidyBlot (STAR209P) 是新型HRP偶联的二抗，它独特之处在于只结合native antibody天然抗体（非还原的）, 即WB实验中加入的一抗，不识别煮过的IP抗体的重链或轻链，这样就不会有干扰信号啦。图1：泳道2使用TidyBlot™二抗，只见目标蛋白Actin条带，一抗使用mouse anti-human actin gamma antibody (VMA00049)；泳道5，6使用常规anti-mouse二抗，重链轻链信号都出现了；泳道3和6没有加WB一抗它的另一个优点是广谱性。适用多个种属来源的单抗和多抗，不用买多个HRP偶联的二抗了，省钱啦！图2： TidyBlot™ 分别检测goat, rabbit和sheep IgG多抗。三种目标蛋白分别是HeLa(YAP1和mTOR)、Hek293 (NFkappaB p65)，使用的一抗分别是Goat anti-YAP1 ( VPA00104...

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  肿瘤抑制基因 肿瘤抑制蛋白表征抗体

  原癌基因和肿瘤抑制基因的突变在多数肿瘤的发生发展中扮演着重要角色。原癌基因倾向于编码生长因子、生长因子受体、细胞信号蛋白及转录因子；肿瘤抑制基因倾向于编码细胞周期调控因子。多数原癌基因通过点突变、基因扩增及迁移被激活，同时导致基因表达水平或蛋白活性水平的改变（Lodish et al. 2000）。与原癌基因相比，肿瘤抑制基因的突变是隐形的，这些基因遵循Knudson或“multiple-hit hypothesis”原则，根据此原则，需要等位基因都发生突变才会引发疾病的过程。尽管只是假说，特定肿瘤抑制基因的等位基因突变，例如BRCA1和BRCA2等位基因突变将会极大增加乳腺癌和卵巢癌的发病风险。例如携带BRCA1等位基因突变的妇女罹患乳腺癌的风险概率为60-90%，罹患卵巢癌的概率为40-60%（NHS UK）。根据这些增加的癌症罹患风险，对那些有家族乳腺癌病史的人进行BRCA1、BRCA2、TP53和PTEN等位基因突变检测是有一定预测意义的。Bio-Rad可提供肿瘤抑制基因相关分析的绝大...