干细胞研究

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  细胞培养入门课 | 第三讲 ：hPSC的冻存与复苏

  在前两期的hPSC细胞培养入门课中，我们解答了以下主题的常见问题：第一讲：hPSC的获取与培养 >第二讲：hPSC的鉴定 >在建立了高质量的hPSC细胞系后，如何有效地保存珍贵的细胞系变得尤为重要。这次就让我们来看看冻存hPSC有哪些值得注意的要点。阅读完本文后，大家如果还有其他关于hPSC冻存的疑问，欢迎在文末留言，或通过以下方式联系STEMCELL技术助手，我们将汇总大家的问题进行统一解答！STEMCELL中国官方联系方式电话：400 885 9050邮件：info.cn@stemcell.com问题1：hPSC冻存有哪些冻存配方？答：hPSC冻存配方通常有两种，一种是含血清的传统冻存配方，通常含有10%DMSO和50 - 90% FBS，但血清成分不确定，且存在批次间差异较大的问题。另一种是不含血清的冻存配方（含DMSO），如mFreSR™ （#05855）, FreSR™-S（#05859）和cGMP级别的CryoStor® CS10（#07930），它们的成分确定，适合与成分确定的培养基配合使用，比如mTeSR™系列培养基（#85850；#1...

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  细胞培养入门课 | 第二讲：hPSC的鉴定

  上一期hPSC细胞培养入门课中的同学在STEMCELL技术助手的帮助下已经成功建立起了iPSC细胞系。这次，他在hPSC的鉴定上出现了一些疑问，就让我们一起来看看这些问题该如何解决吧！问题1：什么情况下需要对hPSC进行质量鉴定？答：我们建议在以下几种情况下都需要及时对hPSC进行鉴定：1、体细胞重编程为iPSC后：由于早期的iPS细胞尚未完全重新编程或稳定（例如表观遗传学变化、DNA 损伤等），它们可能暂时无法有效地进行分化，因此可能需要进一步培养传代，建议培养到第15代后，再进行质量鉴定，来确认您重编程的细胞是否已经具有iPSC的特征与分化潜能。2、hPSC长期在体外维持培养：在hPSC长期在体外传代后，部分细胞可能出现染色体和遗传变异，而异常的hPSC亚群可能会出现生长优势，从而影响整个细胞系，因此我们推荐在连续维持培养每十代左右就及时对细胞系进行鉴定。3、hPSC形态、增殖、分化能力等出现异常时：hPSC在体外生长时是有分化倾向的，能够分化成三个胚层...

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  细胞培养入门课 | 第一讲：hPSC的获取与培养

  近日，某同学所在课题组打算用hPSC作为模型研究某个遗传疾病的机理，但他没有任何hPSC的培养基础，于是联系了我们经验丰富的STEMCELL技术助手来解答。他的问题很有代表性，我们在此将问答内容作为“细胞培养入门课”的第一讲分享给大家。 问题1：我想培养人多能干细胞（hPSC）并对其进行目的基因敲除来模拟某个遗传疾病，但是要怎样获得hPSC细胞系呢？答：1998年，威斯康星大学教授詹姆斯·汤姆森（James Thomson）等人第一次成功建立了人类胚胎干细胞系，包括H1, H7, H9等等都是在科研领域常用的胚胎干细胞系，可以在细胞库购买。问题2：但是我找了好多途径都买不到，我是否能够直接将病人的体细胞诱导为iPSC？答：当然，你也可以尝试通过引入外源的重编程关键基因（OCT4, SOX2, KLF4, c-Myc等）进行体细胞重编程，目前使用比较多的是成纤维细胞重编程（#05930）、血细胞重编程、尿源细胞重编程等。点击链接查看ReproRNA™-OKSGM试剂盒的重编程方法与效率>...

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  人多能干细胞培养技术贴士

  问题 1：细胞培养过程中过度分化（>20%）确保您的完全培养基（如：mTeSR™ Plus或mTeSR™1）在2-8°C下的保存时间小于两周。确保在细胞传代之前去除掉已分化的区域。避免培养板放置在细胞培养箱外的单次时间超过15分钟。确保细胞传代后获得的细胞团块大小均一。确保当大部分克隆生长至较大、致密而且中心较边缘密度更大时及时传代，不要生长过度。减少细胞传代时铺板的细胞团块数量来降低克隆密度。减少用ReLeSR™细胞传代时的孵育时间，因为有些细胞系会非常敏感。问题 2：使用ReLeSR™时获得的细胞团块大小不理想如果获得了比较大的细胞团块（比如，平均大小大于200um）-上下吹打细胞团块时，避免产生单细胞。-延长1-2分钟的孵育时间。如果获得了比较小的细胞团块（比如，平均大小小于50um）-减少消化后对细胞团块的操作。-缩短1-2分钟的孵育时间。问题 3：使用ReLeSR™时，已分化细胞与克隆一起被消化下来减少1-2分钟ReLeSR™的孵育时间。孵育温度改至室温...